SAGE 분석을 통하여 14가지 발현이 달라지는 유전자를 찾았는데 이들은 MUC5B, PLUNC, GAPDL4, AQP5, TSC, SERPIND1, XAGE1, AZGP1, WFDC2, VCC1, CAPS, and three hypothetical 유전자들임. 폐선암과 정상폐조직을 가지고 real-time PCR방법으로 이들의 mRNA 발현양을 비교한 결과 PLUNC와 XAGE1의 발현이 폐암에서 증가되어 있었고 하나의 hypothetical 유전자의 발현이 감소되어 있다는 것을 확인하였음. 다른 유전자들의 발현양은 정상조직에 비해 유의하게 차이가 없었음. 폐암에서 PLUNC와 XAGE1의 과발현에 대해서는 이미 발표가 되어 있어서 (Iwao et al., 2001; Wang et al., 2001), 우리 실험에서는 이전까지 보고되지 않았던 한가지 hypothetical 유전자에 대해 실험을 진행하였고 이를 LLC-1 (Lost in Lung Cancer-1) 으로 명명하였음. LLC-1의 발현은 16 가지 폐암 조직과 이와 같이 절제된 정상폐 부분의 조직에 대해 real-time PCR을 시행하였는데, 9개의 폐암에서 유의한 발현감소를 보였음. 이에 9가지 폐암세포주에 대해 realtime PCR을 시행하여 LLC-1의 발현을 다시 확인하였는데 H520 세포주에서 암이 아닌 폐조직의 발현양에 비해 2.3% 정도 발현되고 나머지 세포주에서는 발현되지 않았음. LLC-1 mRNA발현을 LLC-1유전자를 probe로 사용하여 RNA in situ hybridization 방법으로 확인하는 실험을 18개 비소세포폐암 (9개 선암, 9개 squamouse carcinoma)에서 시행하였음. 염색pattern에 의하면, LLC-1의 발현은 정상조직의 상피세포에 국한되어 발현되고 9개 모두의 선암세포조직과 9개중 8개 squamouse carcinoma조직에서 발현이 되지 않았음. 한재의 squamous cacinoma 조직에서 LLC-1이 약하게 염색되었으며 difuse한 염색 pattern을 보였음. LLC-1의 발현은 1개의 squamouse carcinoma 조직 주위와 4개의 adenocarcinoma 조직주위에 존재하는 정상조직의 epithelial cell에서 발현을 확인할 수 있었음. 대조염색으로 사용했던 vWF message는 예상했던데로 혈관세포의 endothelial cell에 국한되어 발현되었으며 그 양상은 정상조직과 암조직에서 차이가 없었음 대부분의 폐암세포주와 일차 폐암조직에서 Q-PCR과 in situ hybridization 실험결과는 LLC-1이 암억제유전자일 가능성을 시사함. 따라서 LLC-1의 발현이 줄어드는 이유를 설명하고자 LLC-1 promotor methylation여부를 관찰하였음. 먼저 H1299와 H358 세포주의 gDNA를 sodium bisulfite처리하고 promotor site를 sequencing하여 모든 CpG island에 methylation되어 있다는 것을 확인하고 MSBE assay를 고안하여 promotor site의 methylation 정도를 evaluate할 수 있도록 하였음. 이 assay의 결과 7가지 폐암세포주에서 methylated peak이 증가하는 것으로 보아 LLC-1의 promotor methylation이 증가되어 있다는 것을 알 수 있었고, 이는 LLC-1 의 promotor methylation이 폐암에서 LLC-1 발현의 감소 원인일 것이라는 것을 시사하는 것이라 하겠음. 또한 LLC-1 promotor methylation과 LLC-1 발현의 원인과 결과의 관계를 알아보기 위하여 demethylating agent인 5-aza dC을 처리하는 실험을 실행하였음. 세포주 3가지에 5-aza dC을 처리한 후 LLC-1 promotor methylation이 감소하는 것을 확인하였고 또한 LLC-1의 발현이 증가하는 것을 확인함으로써 LLC-1 promotor methylation이 LLC-1 발현의 원인이 된다는 것을 확인하였음 LLC-1의 기능에 대해 연구하고자 폐암세포주에 LLC-1을 과발현시켜서 세포의 성장을 비교하였음. H1703, H358, H128세포주에서 성장이 억제되는 것을 확인하였고 PARP의 fragmentation이 증가한다는 것도 확인함으로써 LLC-1은 폐암세포주에서 apoptosis를 유발한다는 것을 알게 되었음. 재조합 LLC-1을 정제하여 생쥐에 세 번 면역하고 비장세포를 분리하여 sp2 myeloma세포와 융합하여 hybrodoma 세포를 만들고 이들이 생산하는 단클론 항체를 스크리닝하여 LLC-1의 특이항체를 찾는 연구를 진행하였으나, 만들어진 모든 단클론항체는 다른 성분들과 cross reaction이 있어서, 현재 이에 대한 연구가 계속 진행 중에 있음. LLC-1의 정상기능을 연구하기 위해 LLC-1이 결여된 knockout mouse model을 확립하고자 하였음. 먼저 생쥐 LLC-1의 BAC clone셋을 확보하여 제한효소로 절단한 후 BAC clone에 13kb insert이 들어 있다는 것을 확인하였고, 이 insert을 정제하여 세가지 primer set를 이용하여 specific sequence가 들어있다는 것을 다시 한번 확인하였으며, 현재 이 clone을 vector에 cloning 하고 있음