□ 전임상 동물실험 ○ 동물 모델실험 및 전임상 동물실험은 전남대학교병원 임상연구소 윤리위원회의 허가를 받아 실시하며, 실험용 동물은 순종 돼지 중 25~35 Kg의 암퇘지를 실험 5일전에 공급받아 전남대학교 의과학연구소에서 관찰한 후 실험을 실시 ○ 실험 5일 전부터 모든 돼지에게 aspirin 100mg과 clopidogrel 75mg을 매일 투여함 ○ 스텐트 삽입은 돼지의 경동맥을 통해 insertion 한 후 관상동맥의 분지(LAD, LCX)에 random으로 식립 ○ 스텐트의 확장은 스텐트가 감겨져 있는 풍선 도자로 스텐트와 관상동맥의 내경 비율이 1.3:1이 되도록 standard inflator를 이용하여 20초간 풍선을 확장 ○ 스텐트 시술 후 돼지의 4주 또는 8주 후에 조직을 harvest하여 다양한 분석을 수행□ 조직 병리학적 처치 및 조직 염색 ○ Hematoxylin amp; Eosin 또는 Modified Movat 등을 이용한 염색기법 분석 ○ Monoclonal antibody를 이용한 면역조직화학적 염색과 Apoptosis에 대한 효과를 알아보기 위해 in-situ nick end labeling(TUNEL) 분석을 실시 ○ TUNEL 분석은 DNA의 3-OH말단에 deoxynucleotide를 추가하는 효소인 terminal deoxynucleotidyltransferase(TdT)를 이용하여 TdT-mediated digoxigenin과 anti digoxigenin-peroxidase와의 발색반응을 이용 ○ Arterial healing을 평가하기 위한 fibrin score를 측정하기 위해 Carstair 염색을 실시 ○ 세포외 기질은 Modified Movat 염색에서 proteoglycan(청색)과 collagen(황색)의 상대적 면적비를 반정량적 방법으로 5 등급으로 구분하여 분석함 ○ 조직 병리 측정 및 관찰은 두 명의 병리학자와 함께 측정하고 Visus 2000 Visual Image Analysis System을 이용하여 분석함 ○ 혈관의 내강 면적(luminal area: LA), 신생 내막 면적(neointima area: NA), 내 탄력층 면적 (internal elastic lamina area: IELA), 중막 면적(media area: MA), 외탄력층 면적(external elastic lamina area: EELA) 등을 측정함 ○ 혈관벽의 손상지수(injury score)는 내탄력층이 손상되지 않고 내피세포만 손상된 경우를 0점, 내탄력층이 손상되고 중막이 눌린 경우를 1점, 내탄력층과 중막이 파괴된 경우를 2점, 중막과 외탄력층이 파괴된 경우를 각각 3점으로 함 ○ Fibrin score는 스텐트 각 절편 당 0에서 3+까지 scale을 사용하여 측정함. 또한 Fibrin에 둘러싸인 스텐트 strut의 %를 측정하고 각 절편 당 4군데의 가장 심한 염증 반응을 보이는 strut에서 총 호산구수를 셈함. Delayed arterial healing은 fibrin이 28일 이상 존재하는 경우로 정의함□ 형태학적 분석 ○ 동물 실험 4주 후 생분해성 스텐트 내강의 형태학적 분석 ○ strut coverage rate를 확인하기 위하여 주사전자현미경으로 촬영하고자 함○ 스텐트가 삽입된 혈관을 추출하여 길이 방향으로 잘라 2차원 단면을 주사전자현미경을 이용하여 스텐트 내강의 재협착 또는 재내피화 정도를 형태학적으로 분석 ○ 미세단층촬영기법을 이용하여 3차원 이미징 및 정량적 분석을 수행□ 혈액적합성 평가 ○ 스텐트 재질 표면의 혈소판 부착 양상의 정량적 평가 ○ 돼지 관상동맥 재협착 모델을 이용하여 스텐트 재협착 및 혈전 형성에 미치는 효과를 평가
